猪链球菌WC-SS7株GDH基因的表达及GDH蛋白单克隆抗体的制备

• 作者: 刘永刚 徐敏 徐明明 李丽琴 武佳斌 王洪峰 王淑杰 石文达 荣福龙 蔡雪辉
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 猪链球菌 GDH蛋白 原核表达 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 980-983
• 页数: 4页
• 分类号: R378
• 字数: 3020字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2009.10.014

摘要

目的 原核表达猪链球菌7型临床分离株WC-SS7的GDH蛋白,制备抗GDH蛋白的单克隆抗体(mAb).方法 将临床分离的猪链球菌7型WC-SS7株的GDH基因克隆入表达载体pET-30a,转入大肠杆菌中,用IPTG诱导表达,用Ni化琼脂糖柱(Pierce)纯化的GDH蛋白免疫BALB/c小鼠,取鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过间接ELISA方法筛选阳性克隆,对抗WC-SS7 GDH蛋白单克隆抗体进行特异性鉴定及亚型鉴定.结果 表达产物经SDS-PAGE凝胶电泳分析后,在约为52KD处可见一条明显的诱导表达带,说明GDH蛋白得到了正确的表达;细胞融合后检测为阳性的细胞株经过3次单克隆筛选,最终得到了6株能和GDH蛋白反应的能稳定分泌单抗的阳性细胞克隆,这些单抗通过Western 鉴定结果显示其具有良好的特异性,6株单克隆抗体亚型鉴定结果显示其亚型均为IgG1型,且轻链均为κ链.结论 本研究成功表达了WC-SS7的GDH蛋白,并获得了6株能和GDH蛋白反应的、能稳定分泌单抗的阳性细胞克隆,所获得的重组GDH蛋白及特异性单克隆抗体能用于猪链球菌结构和功能的研究,为猪链球菌临床感染血清学诊断方法的建立奠定基础.