产肠毒素性大肠杆菌K88与K99菌毛蛋白的串联表达

• 作者: 崔言顺 李建亮 沈志强 王金良 聂小想 逄媛 郭广君
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大肠杆菌 K88 K99 串联表达
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 437-440
• 页数: 4页
• 分类号: S852.61
• 字数: 2863字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank中发表的E.coli K88、K99基因序列,分别设计合成1对引物.利用PCR技术,以大肠杆菌C83907和C83644的质粒为模板分别扩增不含信号肽的K88及K99基因.通过分离、纯化、限制性核酸内切酶酶切,连接和转化,构建了含K88-K99串联表达载体的重组菌株BL21(DE3)(pETK88CK99).结果显示,经酶切,PCR鉴定和DNA序列分析,证实了构建的重组质粒pETK88CK99中含有K88K99融合基因,且基因序列和阅读框架均正确.经过SDS-PAGE分析,串联表达蛋白含量占菌体蛋白的40%左右,经Western blotting检测,该串联表达蛋白能被大肠杆菌K88、K99标准血清识别.结果表明,构建的重组菌株可以作为预防新生仔猪大肠杆菌性腹泻基因工程疫苗的候选菌株.