内标多重荧光RT-PCR同时检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型

• 作者: 何雅青 余以刚 刘冬梅 吴晖 张经纬 李小凤 李惠芳 杨晓泉 杨洪 肖性龙 陈谷
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 内标 多重荧光RT-PCR EV71 柯萨奇病毒A16型 检测
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 方法
• 页码范围: 98-104
• 页数: 7页
• 分类号: Q93-3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2009.01.017

摘要

[目的]为对当前爆发的手足口病进行快速准确的检测.[方法]本研究建立了含内标的同时检测EV71和CA16的多重荧光RT-PCR方法,对该方法的特异性、灵敏度等进行评估,并对400多份临床样品进行了检测.[结果]实验结果表明,该检测方法特异性强,对10株EV71病毒、8株CA16病毒和25株其他人类病毒进行了检测,特异性为100%;该检测方法对EV71和CA16的检测灵敏度分别达到0.1 TCID50和1 TCID50将0.1～104 TCID50/mL EV71和CA16样本进行重复性实验,其变异系数分别为0.9%～2.0%和0.9%～2.3%.对400多份临床样品分别进行荧光RT-PCR检测和传统方法检测,结果显示,荧光RT-PCR对EV71和CA16的阳性检出率平均为46.1%和14.2%,比传统方法(34.5%和12.8%)的阳性检测率高.另外,实验数据显示,在粪便、直肠拭子、咽喉拭子样本中,PCR抑制物存在的比例为1.8%～3.4%,表明内标对监控PCR抑制物的存在具有重要作用.[结论]本方法能同时对EV71和CA16进行快速检测,并且灵敏度高,特异性好,由于加入了内标,能有效地监控假阴性的出现,适合于手足口病的临床检测.