含非竞争性内标四重荧光RT-PCR方法检测手足口肠道病毒方法的研究

• 作者: 倪敏君 周冬根 孙大为 张升 王燕 翟敏
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 医学
• 关键词: 四重荧光RT-PCR 非竞争性内标 手足口 肠道病毒 检测
• 年，卷（期）: 2012,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 144-150
• 分类号: R450
• 字数: 5009字
• 语种: 中文

摘要

旨在了解手足口病的流行和感染情况,并进行快速准确的检测.建立了含非竞争性内标的同时检测肠道病毒通用型、肠道病毒EV71型及柯萨奇病毒CA16型的四重荧光RT-PCR方法,对该方法的特异性、灵敏度等进行评价,并对多份临床样本进行应用检测.结果表明,该检测方法特异性强,对肠道病毒及其他人类非肠道病毒进行检测,显示了良好的特异性；该检测方法对EV71型和CA16型的检测是敏度分别达到31.25TCID50和1.25×102 TCID50；将浓度为l×104 TCID50及5×102 TCID50的EV71样本进行重复性试验,其变异系数均小于1.5％；将浓度为5×102-5× 105 TCID50的EV71和CA16样本进行线性试验,其相关系数R2值在0.982-0.998之间.采用本研究建立的方法检测40份疑似临床样本,最后检出31份肠道病毒阳性样本,其中8例EV71型阳性,13例CA16阳性.另外,试验数据表明,内标对监控PCR抑制物的存在具有重要作用.本方法能同时快速检测所有肠道病毒并进行EV71型及CA16型的分型,并且灵敏度高、特异性好、扩增效率高,由于加入了内标,能有效地监控假阴性的出现,适合于手足口病的临床检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙大为	宁波出入境检验检疫局国际旅行卫生保健中心	8	119	5.0	8.0
2	周冬根	宁波出入境检验检疫局国际旅行卫生保健中心	4	6	1.0	2.0
3	王燕	宁波出入境检验检疫局国际旅行卫生保健中心	5	43	2.0	5.0
4	倪敏君	宁波出入境检验检疫局国际旅行卫生保健中心	4	8	1.0	2.0
5	张升	宁波出入境检验检疫局国际旅行卫生保健中心	7	7	1.0	2.0
6	翟敏	宁波出入境检验检疫局国际旅行卫生保健中心	5	10	1.0	2.0