应用RNA聚合酶Ⅰ反向遗传操作技术拯救汉滩病毒84FLi株微基因组

• 作者: 姜泓 孙利 张野 李新红 王平忠 白雪帆 黄长形
• 来源期刊: 中华传染病杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 汉滩病毒 遗传学技术 微基因组 DNA指导的RNA聚合酶类
• 年，卷（期）: 2009,（1）
• 所属期刊栏目: 基础论著
• 页码范围: 6-10
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 3905字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1000-6680.2009.01.003

摘要

目的 建立基于汉滩病毒(HTNV)84FLi株L片段的RNA聚合酶Ⅰ微基因组拯救体系.方法 将含有氯霉素乙酰转移酶(CAT)编码区的cDNA插入含有HTNV 84FLi株L片段5'端和3'端非编码区的质粒内的两个非编码区之间,将此eDNA嵌合体(polⅠ表达盒)克隆人人polⅠ肩动子和终止子之间,分别获得正义和反义方向的RNA polⅠ转录报告质粒.用报告质粒转染293T细胞或等量293T和HTNV感染的Vero混合培养细胞,在HTNV的L蛋白和核衣壳蛋白表达质粒共转染后48 h收获细胞,检测CAT活性.用上清液感染293T细胞,了解CAT活性的传代能力.结果 构建了正义和反义方向的HTNV 84FLi株L片段微基因组RNA聚合酶Ⅰ报告质粒pLvRNA-CAT和pLcRNA-CAT,用此质粒转染细胞后能检测到CAT的表达,且CAT活性能在拯救病毒微基因组中传代.结论 应用RNA聚合酶Ⅰ反向遗传操作技术成功拯救了HTNV 84FLi株微基冈组.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李新红	第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心	17	87	4.0	9.0
2	黄长形	第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心	101	516	12.0	17.0
3	孙利	第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心	12	31	3.0	5.0
4	王平忠	第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心	72	342	10.0	14.0
5	张野	第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心	48	152	7.0	10.0
6	姜泓	第四军医大学唐都医院全军感染病诊疗中心	30	104	5.0	9.0