猪瘟病毒荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 刘建营 李玉林 王云龙 陈小科 韩洁
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 荧光定量PCR TaqMan探针
• 年，卷（期）: 2009,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 36-40
• 页数: 5页
• 分类号: S852.651
• 字数: 4031字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-5038.2009.05.009

摘要

通过RT-PCR方法克隆了猪瘟病毒(CSFV) 5′端非编码区(UTR)的一段靶序列,构建重组质粒作为标准阳性模板.同时根据GenBank中的靶序列设计了用于FQ-PCR的一对引物和一条TaqMan探针.通过条件优化,以定量的10倍系列稀释的质粒为标准品进行荧光定量PCR扩增并制作标准曲线,建立了CSFV检测的荧光定量PCR方法.结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0×100拷贝/μL,线性范围为 109～100,达10个数量级;对起始浓度为1.0×109、1.0×108、1.0×107拷贝/μL的标准品的最终实际测得值(Ct)分别为19.73、22.95和26.24;变异系数分别为0.61%、1.77%和1.18%,均小于5%,说明此方法具有良好的准确性和重现性.对阳性组织病料的检测表明,该方法的检测灵敏度高出常规PCR,与套式PCR具有相近的灵敏度.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王云龙		1	13	1.0	1.0
5	刘建营		7	19	2.0	4.0
6	韩洁		2	20	2.0	2.0
7	陈小科		9	81	6.0	9.0
8	李玉林		35	123	7.0	9.0