福氏2a志贺菌MarA蛋白纯化复性及活性检测

• 作者: 周绪正 张继瑜 李剑勇 李金善 牛建荣 王松泰 魏小娟
• 来源期刊: 中国公共卫生
• 学科: 医学
• 关键词: MarA蛋白 纯化 复性 活性检测
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 185-186
• 页数: 2页
• 分类号: R378.2+5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1001-0580.2009.02.030

摘要

目的 纯化、复性志贺菌MarA蛋白并分析其生物学活性.方法 将构建好的BL21大肠埃希菌工程菌经异丙基-β-D-硫代-乳糖苷(IPTG)诱导,His-tag形式表达MarA融合蛋白(约21ku),采用超声波破碎细菌,提取包涵体用高浓度尿素裂解,经镍柱亲和层析纯化,纯化后的蛋白质在小分子保护剂及还原型谷胱甘肽(GSH)/氧化型谷胱甘肽(GSSG)的存在下对融合蛋白进行复性.用凝胶薄层扫描法测纯度.结果 从融合蛋白包涵体中获得纯度达90%以上的目的 蛋白,免疫蛋白印迹试验结果显示,复性后的MarA融合蛋白能与抗福氏志贺菌抗体发生特异性结合.结论 成功建立有效纯化融合蛋白包涵体His-MarA的方法.