甘蔗锌指蛋白ShZP基因正义反义植物表达载体的构建及转化烟草

• 作者: 喻时周 张树珍 杨本鹏 罗遵喜 蔡文伟 顾丽红
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: 甘蔗 锌指蛋白 植物表达载体 遗传转化
• 年，卷（期）: 2009,（9）
• 所属期刊栏目: 生物技术应用及组织培养
• 页码范围: 1330-1336
• 页数: 7页
• 分类号: S5
• 字数: 3520字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2009.09.021

摘要

根据本实验室克隆的甘蔗锌指蛋白ShZP基因cDNA序列,在开放阅读框两侧设计特异引物,通过PCR扩增引入相应的酶切位点,把甘蔗ShZP基因的编码区(大小为725bp)cDNA片段,分别以正向和反向插入到中间载体pCRBI的Prd29A启动子和NOS终止子之间,构建了其正义植物表达载体pCRBIShZP和反义表达载体pCRBIantiShZP.采用冻融法分别将pCRBIShZP和pCRBIantiShZP导入根瘤农杆菌菌株EHA105中,通过农杆菌介导法对烟草进行转化,经过12mg/L的PPT连续抗性筛选,共获得23株抗性植株,对其中的5株转正义基因烟草植株和9株转反义基因烟草植株进行PCR检测,分别获得3株转正义基因的阳性植株和4株转反义基因的阳性植株.PCR检测结果初步证明外源甘蔗锌指蛋白ShZP基因已成功整合到烟草基因组中,这一研究为植物抗逆基因工程研究打下了一定的基础.