甘蔗锌指蛋白基因ShSAP1的RNAi载体构建及对甘蔗的转化

• 作者: 张树珍 李晓君 武媛丽 王俊刚
• 来源期刊: 热带作物学报
• 学科: 农学
• 关键词: ShSAP1 pTCK303 载体 RNA干扰 基因功能
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 作物营养、栽培与遗传育种
• 页码范围: 993-997
• 分类号: Q943.2|S566.1
• 字数: 2808字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2011.06.002

摘要

植物中具有A20/AN1锌指结构域的蛋白参与了逆境应答,为研究甘蔗A20/AN1型锌指蛋白基因ShSAP1的功能及在甘蔗抗逆育种方面的价值.本研究通过构建ShSA P1基因的RNAi载体并进行甘蔗的遗传转化,以期通过反向遗传学进行ShSAP1的功能分析.将ShSA P1锌指编码区片段分别以正向和反向插入到中间载体pTCK303内含子的两侧,构建中间载体pTCK-iShSAP1,而后把干扰片段连入pCAMBIA-GUS中,获得RNAi表达载体pCAMBIA-iShSAP1,将该载体转导根癌农杆菌EHA105,通过农杆菌介导法侵染甘蔗胚性愈伤组织,并对部分转化幼苗进行了初步的PCR鉴定.经过限制性内切酶分析和测序验证,RNAi载体pCAMBIA-iShSAP1构建成功;转化幼苗经PPT抗性筛选后,获得了58株抗性植株,对抗性幼苗进行了Bar基因的PCR检测,得到6株PCR阳性植株.本研究完成了ShSAP1的RNAi载体构建及对甘蔗的遗传转化,为ShSAP1的功能研究打下了一定的基础.