一种用质粒DNA转化大肠杆菌感受态细胞的实用操作技巧

• 作者: 李红民 董文博 陈洪栋
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: Escherichia coli 转化方法 质粒
• 年，卷（期）: 2009,（z1）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 297-299
• 页数: 3页
• 分类号: Q5
• 字数: 1638字
• 语种: 中文

摘要

目的是建立一种简化、实用的用质粒DNA转化大肠杆菌的操作方法.采用氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞.以质粒pUC18,pCSN44,pAN52-1Not,pETts,pANth和植物双元表达栽体pCAMBIA1301分别转化用于质粒扩增与保存的常用大肠杆菌菌株Top10和DH5α以及用于原核表达的常用大肠杆菌菌株BL21(DE3)和TB1.质粒与感受态细胞的混合液置冰上作用一定时间后,直接涂布含有筛选抗生素的LB平板,于37℃培养12～16h.结果表明,用不同大小的质粒DNA转化不同的大肠杆菌菌株,都可以获得满足实验要求,转化效率可高达103～4阳性克隆/μg.该方法较标准的转化流程更加简便、省时、实用.