重组腺病毒介导的血管内皮生长因子165在大鼠骨髓基质细胞中的表达

• 作者: 宋慧锋 柳春明 柴家科 高全文
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 腺病毒科 血管内皮生长因子类 骨髓基质细胞 基因疗法
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 192-195
• 页数: 4页
• 分类号: R349.64
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2009.02.020

摘要

目的 利用AdEasy腺病毒载体系统构建携带血管内皮生长因子165(VEGF165)的重组腺病毒(Ad-VEGF165),并观察Ad-VEGF165转染大鼠骨髓基质细胞(bMSCs)后VEGF165的表达情况. 方法 将PCR获取的VEGF165目的 基因插入到pAATrackCMV中,构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-VEGF165,经Pme I酶切线性化后,采用电穿孔法转化到含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183大肠杆菌感受态细胞中,挑选同源重组菌落.提取质粒并用Pac I酶切鉴定.线性化重组质粒pAdEasy-VEGF165转染293T细胞,包装成重组腺病毒颗粒.并扩增收集重组腺病毒,测定病毒滴度.体外培养大鼠骨髓基质细胞,Ad-VEGF165转染骨髓基质细胞,转染后在荧光显微镜下观察.转染的骨髓基质细胞采用RT-PCR和ELISA法检测VFGF165的表达水平. 结果 经酶切鉴定,基因测序及绿色荧光观察证实成功构建了携带VEGF165基因的重组腺病毒,并扩增出109pfu/ml的高滴度重组腺病毒.Ad-VEGF165转染骨髓基质细胞后,RT PCR证明转染的骨髓基质细胞内有VEGF165mRNA表达.ELISA检测发现转染组上清液中VEGF165蛋白分泌量明显高于对照组(P＜0.01). 结论 pAdEasy-VEGF165转染对骨髓基质细胞的增殖能力无明显影响,而且骨髓基质细胞能够表达并分泌VFGF165为研究骨组织工程血管化局部基因治疗奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	柴家科	解放军总医院第一附属医院烧伤整形科	206	1317	17.0	23.0
2	柳春明	解放军总医院整形外科	56	339	9.0	15.0
3	宋慧锋	解放军总医院第一附属医院烧伤整形科	25	122	6.0	10.0
4	高全文	解放军总医院第一附属医院烧伤整形科	24	117	7.0	9.0