人泛素偶联酶UBE2C/UbcH10在大肠埃希菌中的诱导表达与鉴定

• 作者: 李明 杜红延 杨学习 王穗海 马奎 黄湘
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 泛素蛋白连接酶类 原核表达 克隆,分子
• 年，卷（期）: 2009,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 166-168
• 页数: 3页
• 分类号: R34-33
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2009.02.012

摘要

目的 构建稳定表达人类泛素偶联酶E2C(UBE2C/UbcH10)蛋白的原核表达载体并在大肠埃希菌中诱导其表达,纯化并鉴定该重组蛋白. 方法 通过PCR扩增获得UbcH10基因,将其克隆至原核表达载体pET32a(+)中,构建重组表达载体,经EcpRI/Xho 1双酶切及测序验证止确后,转化至大肠埃希菌BL21,经IPTG(终浓度Immnol/L)诱导表达4h.采用SD6-PAGE、Westernblotting等方法鉴定表达产物,用Ni-Sepharose亲和层析和Sephadex G-50分子筛纯化UbcH10蛋自. 结果 成功构建UbcH10基因的原核表达载体,经IPTG诱导后在大肠埃希菌B121中获得大量重组蛋白.该重组蛋白以町溶形式表达,表观分子量约为29kD,表达量约占黹体蛋白总量的40%.Westem blotting检测在29kD附近出现预期条带,与目的 蛋白的理论计算值相吻合.纯化后的UbcH10蛋白终浓度为8.82mg/ml,纯度达90%以上. 结论 成功表达并纯化了 UbcH10重组蛋白,为进一步研究其结构、功能以及该蛋白在肿瘤发生发展过程中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李明	南方医科大学生物技术学院	212	862	14.0	18.0
2	王穗海	南方医科大学生物技术学院	33	92	5.0	7.0
3	杨学习	南方医科大学生物技术学院	47	163	6.0	9.0
4	杜红延	南方医科大学生物技术学院	35	97	5.0	8.0
5	黄湘	南方医科大学生物技术学院	59	175	7.0	9.0
6	马奎	南方医科大学生物技术学院	2	2	1.0	1.0