pcDNA3.1(-)/UBE2C质粒在Chang Liver细胞中的表达和鉴定

• 来源期刊: 广东医学
• 学科: 医学
• 关键词: UBE2C 真核表达质粒 Chang Liver 构建 表达
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1462-1465
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 3926字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒并建立人正常肝细胞Chang Liver的稳定表达株.方法 采用RT-PCR法从HepG2细胞中克隆得到UBE2C cDNA全长序列,将它与pMD18-T栽体连接.双酶切和测序鉴定后,再将UBE2C片段亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-).构建好的pcDNA3.1(-)/UBE2C真核表达质粒经双酶切和测序鉴定后,采用脂质体法将其转入Chang Liver细胞株中,经G418筛选,得到阳性克隆细胞株,再用Western blot法检测转染后UBE2C的蛋白表达水平.结果 pcDNA3.1(-)/UBE2C质粒经双酶切鉴定和DNA测序证实,目的 基因UBE2C的序列完全正确,真核表达质粒成功构建.Western blot检测显示,转pcDNA3.1(-)/UBE2C组UBE2C的蛋白表达水平高于转pcDNA3.1(-)组,差异有统计学意义(P<0.01).结论 成功构建UBE2C基因的真核表达质粒并建立其稳定表达的Chang Liver细胞株,为下一步研究奠定基础.