pcDNA3.1/SjDLC和pcDNA3.1/mIFN-γ重组质粒构建及表达

• 作者: 刘彦 张愉快 梁瑜 王可耕 肖建华 胡丽 阳青兰 高勇强
• 来源期刊: 中南医学科学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: DNA疫苗 动力蛋白轻链 干扰素-γ
• 年，卷（期）: 2017,（6）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 558-561,579
• 页数: 5页
• 分类号: R383.24
• 字数: 3290字
• 语种: 中文
• DOI: 10.15972/j.cnki.43-1509/r.2017.06.006

摘要

目的 构建日本血吸虫动力蛋白轻链DNA疫苗和小鼠干扰素真核表达质粒,研究其在HeLa细胞及动物体内的表达.方法 设计特异性引物,PCR扩增获取动力蛋白轻链(SjDLC)与干扰素-γ(IFN-γ)基因,克隆于pcDNA3.1真核质粒,经双酶切及测序鉴定.将两种重组质粒分别转染至HeLa细胞,Western blot鉴定其表达.真核质粒经左腿股四头肌免疫小鼠,在末次免疫2周后,PCR法检测小鼠肌组织内SjDLC和IFN-γ基因,免疫组织化学法检测基因的表达,MTT法检测T细胞增殖水平.结果 PCR和双酶切能检测到280 bp的SjDLC基因及480 bp的IFN-γ基因;Western blot显示在12 kDa和19 kDa处有阳性反应条带,与SjDLC和IFN-γ分子量大小一致,两种基因能在HeLa细胞中表达.PCR及免疫组化显示两种基因能在小鼠肌肉组织中存在和表达.MTT法显示两种质粒均能刺激T细胞增殖.结论 成功构建pcDNA3.1/SjDLC和pcDNA 3.1/mIFN-γ真核质粒,两种质粒能在HeLa细胞和动物体内表达.