大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基K63突变体表达载体的构建及其在真核细胞中的表达

• 作者: 仲飞 李巍 李楠 李秀锦 潘素敏 王微 韩冬梅
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 大肠杆菌 大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基 基因克隆 定点突变 CD5信号肽 真核表达
• 年，卷（期）: 2009,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 5-8
• 页数: 4页
• 分类号: S852.61
• 字数: 3188字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-7034.2009.04.002

摘要

采用PCR方法从产肠毒素大肠杆菌(ETEC)44815菌株基因组中扩增不耐热肠毒素A亚基(LTA)编码基因,并将大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基基因插入到含有人CD5信号肽序列的pcDNACD5sp真核表达载体中,构建成pcDNACD5sp/LTA分泌性真核表达载体,然后采用定点突变方法将大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基第63位的丝氨酸改变为赖氨酸,构建成pcDNACD5sp/LTAK63突变体,经磷酸钙介导将pcDNACD5sp/LTAK63质粒转染HEK293T细胞进行表达.结果表明:试验克隆的大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基基因与GenBank中大肠杆菌不耐热肠毒素A亚基基因序列相比,碱基序列、氨基酸序列同源性均达99%;表达产物经Western-blot检测,结果说明构建的含有人CD5信号肽的LTAK63基因能够在真核细胞中进行分泌性表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李秀锦	燕山大学环境与化学工程学院生物工程系	20	122	7.0	10.0
2	李楠	河北农业大学动物科技学院基础兽医部	27	56	3.0	6.0
3	仲飞	河北农业大学动物科技学院	21	74	5.0	7.0
4	王微	河北农业大学动物科技学院基础兽医部	10	53	5.0	7.0
5	韩冬梅	河北农业大学动物科技学院基础兽医部	9	53	5.0	7.0
6	李巍	河北农业大学动物科技学院基础兽医部	24	99	6.0	9.0
7	潘素敏	河北农业大学动物科技学院基础兽医部	6	33	3.0	5.0