新疆出血热病毒核蛋白NP的原核表达及其单克隆抗体的研制

• 作者: 孟逊 师永霞 李小波 洪烨 相大鹏 郑夔 黄吉城
• 来源期刊: 中国卫生检验杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 新疆出血热病毒 核衣壳蛋白 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2009,（6）
• 所属期刊栏目: 微生物检测方法
• 页码范围: 1309-1311
• 页数: 3页
• 分类号: R512.8
• 语种: 中文

摘要

目的:利用原核表达系统表达新疆出血热病毒(CCHFV)核衣壳蛋白NP,并通过杂交瘤细胞技术制备其单克隆抗体.方法:利用pET大肠杆菌系统表达具有抗原性的重组NP蛋白,经包涵体纯化后免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,间接ELISA筛选阳性的杂交瘤细胞,并结合Western blot和免疫荧光试验对抗体的特异性进行鉴定,筛选与NP蛋白有强结合能力且配对结果较好的一对单克隆抗体.结果:经间接ELISA筛选阳性的杂交瘤细胞,获得2株能稳定分泌抗NP蛋白抗体、配对效果较好的杂交瘤细胞株,将其命名为10B12和3G5.Western blot试验证明它们免疫小鼠后腹水中的单克隆抗体能特异性识别NP蛋白,免疫荧光试验显示两个单克隆抗体均与表达NP蛋白的杆状病毒感染的昆虫细胞抗原片有特异性荧光.双抗体间接ELISA表明它们可检测的重组NP蛋白的线性范围为1～20 ng,检测灵敏度为1 ng.结论:成功获得了针对NP蛋白的特异性单克隆抗体,为进一步研究新疆出血热免疫胶体金的研发奠定必要的物质基础.