人肠三叶因子酵母双杂交诱饵载体的构建及其自激活作用鉴定

• 作者: 吕尚军 吴炜 孙勇 张勇 彭曦 王林 王臻
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肠三叶因子 双杂交系统技术 自激活作用
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 957-959
• 页数: 3页
• 分类号: R349.81
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2009.08.008

摘要

目的 构建人肠三叶因子酵母双杂交诱饵载体并验证其自激活作用.方法 以pET32a-hITF质粒为模板,PCR扩增hITF成熟肽cDNA片段,Sal I和EcpRV双酶切后连接到pENTR3c载体,通过λ噬菌体臂同源重组反应(LR重组反应)将hITF片段连接到酵母双杂交诱饵载体pDEST32,获得诱饵质粒pDEST32-hITF,测序后与酵母双杂交空质粒pDEST22共转化到酵母菌株Mav203,经营养缺陷培养基筛选后,观察在含不同浓度3-氨基三唑(3AT)的营养缺陷培养基中pDEST32-HITF的自激活作用.结果 成功克隆hITF基因片段,构建酵母双杂交诱饵质粒pDEST32-hITF,其与酵母双杂交空载体pDEST22共转化到酵母菌株Mav203后,可在3AT浓度为0、10、25mmol/L的营养缺陷培养基上生长,而在3AT浓度为50、75、100mmol/L的营养缺陷培养基上不能生长.结论 成功构建酵母双杂交诱饵载体,经验证50mmol/L及以上浓度的3AT营养缺陷培养基可以抑制其自激活作用.