TcLr19PR1、TcLr19PR2和TaLr19TLP1的酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

• 作者: 刘大群 张家瑞 张艳俊 梁芳 王海燕 王菲
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 病程相关蛋白 酵母双杂交 诱饵载体 自激活检测 毒性检测
• 年，卷（期）: 2016,（6）
• 页码范围: 47-51
• 页数: 5页
• 分类号: Q819
• 语种: 中文
• DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2016.0131

摘要

在前期研究的基础上，将成功克隆得到3个病程相关蛋白PR1、PR2和PR5的序列，分别命名为TcLr19PR1、TcLr19PR2和TaLr19TLP1。将这3个基因分别连接到酵母双杂交诱饵载体 pGBKT-7上，并转化到感受态菌株 Y2 HGold中，检测其毒性和自激活性。结果显示，成功构建了包含目的基因的诱饵重组载体pGBKT-7-TcLr19PR1、pGBKT-7-TcLr19PR2和 pGBKT-7-TaLr19TLP1；将转化产物涂布于 SD／ Trp／X平板上，生长良好，并出现阳性克隆；毒性检测中，将3个诱饵重组载体与空载体在 SD／ Trp 液体培养基中的生长情况进行对比，发现诱饵无毒性；自激活检测试验中，重组载体无法在二缺、三缺和四缺培养基中正常生长，证明诱饵无自激活性。因此，本研究成功构建的3个诱饵重组载体可用于3个 PR蛋白互作蛋白的筛选，为进一步研究其在小麦与叶锈菌互作中的分子机理奠定基础。