水稻SGR酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定

• 作者: 兰兆吉 吴国江
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 生物学
• 关键词: Staygreen 酵母双杂交系统 Western印迹 自激活检测
• 年，卷（期）: 2008,（17）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 7150-7151,7303
• 页数: 3页
• 分类号: Q782
• 字数: 2715字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2008.17.040

摘要

[目的]揭示SGR基因的作用机理.[方法]构建水稻SGR基因在酵母双杂交体系中的诱饵栽体,并对其表达进行鉴定,将目的基因SGR与诱饵质柱栽体pGBKT7通过双酶切定向重组构建诱饵质粒pGBKT7-SGR,将pGBKT7-SGR转入酵母菌株Y187中,利用Western印迹法检测其在酵母中的表达,通过缺陷性培养基培养进行自激活检测.[结果]将鉴定正确的重组质粒刹序结果与SGR基因比较,序列完全一致,阅读框分析正确.栽体pGBKT7-SGR在酵母菌株Y187中可以正确表达出融合蛋白.重组诱饵pGBKT7-SGR质粒对酵母无毒性,其表达产物不能激活酵母菌株Y187的营养缺陷型报告基因.[结论]该重组诱饵质粒可用于酵母双杂交体系,该研究为从cDNA文库筛选水稻诱饵蛋白SGR的互作蛋白奠定了基础.