利用重组PCR技术构建适合真菌ATMT转化的GFP基因表达载体

• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 重组PCR技术 绿色荧光蛋白 ATMT转化 表达载体
• 年，卷（期）: 2009,（27）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 12972-12974
• 页数: 3页
• 分类号: S188
• 字数: 3182字
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建适合真菌ATMT转化的GFP基因表达载体.[方法]利用含有GFP基因和Nos终止子的A2GFP质粒和含有普遍适于真菌基因表达的构巢曲霉启动子(Ptrpc)的pUCATPH质粒,通过重组PCR技术构建Ptrpc-GFP-Nos重组基因,然后插入到农杆菌质粒pCAMBIA 1300的多克隆位点,构建适合真菌ATMT转化的GFP基因表达载体,并对其进行酶切和测序鉴定.[结果]通过重组PCR技术,仅通过Ptrpc启动子基因扩增、GFP-Nos基因扩增、Ptrpc-GFP-Nos重组基因扩增、1次双酶切、1次连接和转化,就成功地构建了适合真菌ATMT转化的GFP基因的表达载体pCAMBIA 1300-PGN,不需要构建中间载体,并大大简化了连接步骤.该载体经过PCR、酶切和测序鉴定,结构正确,连接准确,序列无误.[结论]该研究为真菌ATMT突变体的构建和快速检测奠定了基础.