珍稀濒危植物大果木莲ISSR—PCR反应体系的建立

• 作者: 付玉嫔 司马永康 吴涛 毛云玲 郝佳波 陈少瑜 韩燕
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 珍稀濒危植物 大果木莲 基因组DNA ISSR-PCR反应体系
• 年，卷（期）: 2009,（31）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 15163-15166
• 页数: 4页
• 分类号: S188
• 字数: 4152字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2009.31.030

摘要

[目的]建立高效稳定的大果木莲ISSR-PCR反应体系.[方法]以珍稀濒危植物大果木莲新鲜嫩叶为材料.在高盐沉淀法提取高质量基因组DNA的基础上,通过ISSR-PCR反应体系中5个主要因素的单因子梯度试验,优化并最终建立了大果木莲稳定而高效的ISSR-PCR反应体系和反应程序.[结果]试验建立的大果木莲的ISSR-PCR反应体系为:加20.μl反应体系中含10 ×buffer2.0μl、Mg~(2+)2.0 mmoL/L、Taq酶0.5 U、DNA模板40 ng、引物0.8 μmol/L、dNTPs0.2 mmol/L和ddH_2O 13.3μl,其反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性1 min,50～60℃退火45 s,72℃延伸2 min.40个循环;72℃完全延伸7 min.[结论]该研究为进一步揭示大果木莲群体的遗传多样性和遗传结构状况以及制定科学的保护措施提供了理论依据.