酵母双杂交诱饵蛋白日本血吸虫抱雌沟蛋白重组质粒的构建及鉴定

• 作者: 刘金明 吴启进 李勉 林矫矫 王小波 石火英 金亚美
• 来源期刊: 中国动物传染病学报
• 学科: 农学
• 关键词: 酵母双杂交技术 抱雌沟蛋白 自激活
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 页码范围: 51-55
• 分类号: S852.735|Q7
• 字数: 3089字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-6422.2010.03.010

摘要

为筛选与血吸虫抱雌沟蛋白相互作用的因子,本研究以抱雌沟蛋白(gynecophoral canal protein of Schistosoma japonicum,SjGCP)为诱饵蛋白构建了用于酵母双杂交筛选系统的重组质粒.根据日本血吸虫抱雌沟蛋白的基因序列设计引物,经过PCR扩增、酶切回收,与经相应酶切的线性化载体pBGKT7-BD连接构建重组质粒.随后将重组质粒pGBKT7-BD-SjGCP转化酵母菌株,测定融合蛋白BD-SjGCP在酵母菌中的自激活活性、对酵母菌生长的影响及在酵母中的表达情况.结果显示构建的重组诱饵蛋白质粒pGBKT7-BD-SjGCP能够在酵母细胞内正确表达,没有独自激活报告基因表达的活性,且其表达对酵母细胞没有毒性,不影响酵母细胞的生长.可见,重组质粒pGBKT7-BD-SjGCP可用于筛选与血吸虫抱雌沟蛋白相互作用的物质.