羟基脲对肝癌细胞HepG2中GADD45β表达影响及其可能机制

• 作者: Bingsen Zhou Peiguo G.Chu Yun Yen 施敏敏 邱伟华 陈皓
• 来源期刊: 中华肝胆外科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 癌,肝细胞 羟基脲 GADD45β 启动子
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 290-294
• 分类号: R9
• 字数: 5976字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1007-8118.2010.04.017

摘要

目的 初步明确肝癌细胞中GADD45β基因近端启动子序列,探索羟基脲对人肝癌细胞HepG2的GADD45β表达影响及可能机制.方法 体外合成GADD45β近端启动子序列群(-618～-314),构建荧光素表达质粒,转染肝癌细胞株HepG2,根据启动子活性强度结合数据库分析存在的转录调节因子结合位点;以实时荧光定量PCR比较羟基脲作用前后HepG2细胞GADD45β表达,并进一步比较羟基脲对GADD45β启动子活性的调控作用、分析羟基脲对HepG2的抑制效应,并通过Caspase-8、Caspase-9和Caspase-3的表达变化测定凋亡的发生和发展.结果 GADD4518近端启动子中含有3个NF-кB(-602/-593、-581/-572、-537/-528)和1个E2F-1(-470/-436)转录调节因子与启动子结合位点;羟基脲能明显诱导HepG2中GADD45β的表达,并呈现出剂量-效应的正相关关系,同时NF-кB和E2F-1启动子均明显增强.羟基脲能够明显抑制HepG2的DNA合成能力和细胞克隆形成能力,同时羟基脲能迅速启动HepG2凋亡的发生和发展.结论 羟基脲能明显诱导肝癌细胞中特异性缺失的GADD45β基因表达,增强转录调节因子的表达水平是其可能的作用机制.