瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)卵黄蛋白原的纯化、性质鉴定及ELISA检测方法的建立

• 作者: 刁晓明 权恒 李云 李育培 盛晓洒 翟旭亮
• 来源期刊: 海洋与湖沼
• 学科: 生物学
• 关键词: 瓦氏黄颡鱼 卵黄蛋白原 纯化 多克隆抗血清 酶联免疫吸附反应(ELISA)
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 页码范围: 91-98
• 分类号: Q956
• 语种: 中文

摘要

腹腔注射17 β-雌二醇(E2),使瓦氏黄颡鱼雄鱼在7天内产生卵黄蛋白原(Vtg).采用凝胶过滤和离子交换两种层析技术,从E2诱导的雄性瓦氏黄颡鱼血浆中分离、纯化出Vtg,采用糖、磷、脂蛋白染色技术证明分离、纯化的蛋白为Vtg,该Vtg在非变性条件下分子量约为240kDa,在SDS 变性条件下分子量约为143kDa.纯化的瓦氏黄颡鱼Vtg经检测显示可能含有类胡萝卜素,但没有二硫键,对热相对稳定.利用纯化的瓦氏黄颡鱼Vtg,制备了兔抗瓦氏黄颡鱼Vtg多克隆抗血清.用双向免疫扩散法测得抗血清的纯度较高,效价为1:32;westem blotting检测显示抗血清的特异性较好.以瓦氏黄颡鱼Vtg多克隆抗血清为抗体,以纯化的瓦氏黄颡鱼Vtg为抗原,建立了间接酶联免疫吸附反应(ELISA)方法检测瓦氏黄颡鱼体内Vtg的含量,标准曲线线性部分的线性方程为y=0.099x+0.4529(R2=0.9327),该方法检测的灵敏度为15.6ng/ml,工作范围为31.2-4000ng/ml,在此范围内,标准曲线具有良好的线性.