剑尾鱼卵黄蛋白原基因片段克隆、表达及蛋白检测方法的建立

• 作者: 刘春 吴淑勤 李凯彬 王芳 聂湘平
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 剑尾鱼 卵黄蛋白原 原核表达 检测
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 883-888
• 页数: 6页
• 分类号: S917
• 字数: 4923字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1005-8737.2007.06.001

摘要

本研究通过对剑尾鱼(Xiphophorus helleri)卵黄蛋白原基因片段的克隆和表达,建立了剑尾鱼卵黄蛋白原蛋白检测方法.根据已发表的底鳉(Fundulus heteroclitus)卵黄蛋白原mRNA序列设计引物,利用RT-PCR法扩增出1段1 118 bp的剑尾鱼卵黄蛋白原cDNA片段,序列分析表明该片段与其他鱼类卵黄蛋白原基因序列相似性较高,其中与底鳉和食蚊鱼(Gambusia affinis)的同源性分别达87.4%和96.7%.在对该片段所编码氨基酸序列可能抗原位点分析的基础上,进行PCR改造构建原核表达载体,预期得到258个氨基酸的表达蛋白.表达载体转入大肠杆菌DH5α,经热诱导后,SDS-PAGE分析有29 kD的表达蛋白产生,与预期相符.以重组蛋白免疫新西兰大白兔,获得抗血清.雌激素(β-雌二醇)对剑尾鱼诱导后,用重组蛋白抗血清作一抗,进行Westernblot分析.结果表明,该抗血清能与剑尾鱼卵黄蛋白原特异结合,可应用于剑尾鱼卵黄蛋白原的检测.卵黄蛋白原是环境雌激素研究中较为特异、灵敏的生物标志物,剑尾鱼卵黄蛋白原检测方法的建立,为剑尾鱼环境监测应用提供良好基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴淑勤	中国水产科学研究院珠江水产研究所	121	1516	22.0	31.0
2	李凯彬	中国水产科学研究院珠江水产研究所	67	669	15.0	21.0
3	聂湘平	暨南大学水生生物研究所	59	1507	22.0	37.0
4	刘春	中国水产科学研究院珠江水产研究所	22	70	6.0	7.0
6	王芳	中国水产科学研究院珠江水产研究所	25	86	6.0	8.0