中国蛇岛蝮蛇毒腺cDNA文库的构建

• 作者: 侯志杰 刘淑清 孙明忠 孙立新 王小平 王立平 郭春梅 颜栋
• 来源期刊: 动物学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 蛇岛蝮 cDNA文库 SMART技术 PCR
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 136-140
• 分类号: Q956
• 语种: 中文

摘要

为研究中国蛇岛蝮蛇(Gloydius shedaoensis shedaoensis)基因工程产品,采用SMART(switchingmechanism at 5'end of RNA transcript)技术构建其毒腺的cDNA表达文库.采用RNAiso试剂提取毒腺总RNA,再采用Poly(A)PuristTM试剂盒分离纯化mRNA,第一链cDNA经反转录合成,双链cDNA经LD-PCR合成并扩增;分级分离去除小片段,收集大于400 bp的cDNA片段,与质粒载体pDNR-LIB连接,采用电转化法将重组质粒转入大肠杆菌感受态细胞DHl0B.构建的蛇岛蝮蛇毒腺cDNA文库库容量为8 x 107fu/ml,大多数插入片段大于1 000 bp,重组质粒表达率高(100%).本研究成功构建了高质量的蛇岛蝮蛇毒腺cDNA文库,表达文库质量高,可用于进一步克隆和表达中国蛇岛蝮蛇蛋白活性组分基因,并对其功能进行研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王立平		6	22	3.0	4.0
2	颜栋	大连医科大学基础医学院	2	4	1.0	2.0
3	孙明忠	大连医科大学基础医学院	27	96	6.0	8.0
4	刘淑清	大连医科大学生物化学与分子生物学教研室	38	105	6.0	8.0
5	郭春梅	大连医科大学生物化学与分子生物学教研室	15	58	5.0	7.0
6	王小平		7	25	3.0	5.0
7	侯志杰	大连医科大学生物化学与分子生物学教研室	2	10	2.0	2.0