肠出血性大肠杆菌VT1B亚单位的重组表达及其单克隆抗体的制备

• 作者: 任晓峰 冯书章 李广兴 洪杰华 霍贵成
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌 VT1B 原核表达 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 475-480
• 页数: 6页
• 分类号: S852.612
• 语种: 中文

摘要

为制备抗肠出血性大肠杆菌(EHEC)VT1B亚单位的单克隆抗体(McAb),以大肠杆菌EDL933的基因组DNA为模板扩增VT1B基因,纯化后经BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切,连入表达栽体pGEX-6P-1,构建重组表达质粒pGEX-VT1B,转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,实现了融合蛋白的高效表达,表达量约占菌体总蛋白的27%.重组蛋白纯化后,免疫BALB/c小鼠制备单克隆抗体,获得3株融合细胞1G11、2H8、1810,Western-blotting表明,此3株单抗能与VT1B蛋白特异性结合而与载体蛋白不反应.Ig亚类分别为IgG1、IgG2a和IgG2b,染色体数均大于100,腹水单抗ELISA抗体效价大于1:256 000,亲和常数分别为0.54×108 M-1、0.95×108 M-1、0.33×107 M-1,间接ELISA叠加试验初步鉴定结果表明,这3株单抗针对的是同一抗原表位.此3株特异性单抗的获得为VT1毒素的检测奠定了基础.