近江牡蛎热休克蛋白70基因的原核表达研究

• 作者: 何毛贤 姚占娟 崔淼 张其中 张占会 李薇
• 来源期刊: 中国水产科学
• 学科: 农学
• 关键词: 热休克蛋白70 原核表达 近江牡蛎
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 424-430
• 分类号: S917
• 字数: 4619字
• 语种: 中文

摘要

近江牡蛎(Crassostrea hongkongensis)热休克蛋白70(HSP70)家族成员是重要的抗逆和潜在污染预警分子.本研究将近江牡蛎HSP70基因cDNA连接到原核表达载体pQE30中,构建近江牡蛎HSP70的重组表达质粒pQE30/HSP70.该重组质粒经酶切和测序鉴定后,转入表达宿主大肠杆菌M15进行诱导表达,经SDS-PAGE电泳和Western blot分析表明,确实获得了重组蛋白的表达.分别在25℃、30℃和37℃下,经0.2mmol/L IPTG诱导融合蛋白表达,其中,在25℃下,诱导的融合蛋白表达量最高,表明该温度为恰当诱导温度;在25℃下,分别诱导重组蛋白表达2 h、4 h、6 h、8 h、12 h和16 h,其中诱导12 h的蛋白表达量最高;大部分融合蛋白以可溶形式存在于大肠杆菌M15中;表达的重组融合蛋白分子量约69kD,并能与鼠源抗6×His的单克隆抗体特异性结合,表明通过原核表达获得了近江牡蛎HSP70蛋白.实验表明,在25℃下,经0.2mmol/L IPTG诱导表达12h,可获得大量可溶近江牡蛎HSP70蛋白.