重组截短型人角质细胞生长因子-1的表达及纯化

• 作者: 刘孝菊 李校堃 王会岩 王晓杰 田海山 邓林 马吉胜 龚守良
• 来源期刊: 吉林大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 高效表达 重组截短人角质细胞生长因子-1 纯化
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 629-633
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

目的:构建高效表达N端缺失的23个氨基酸重组人角质细胞生长因子1( rhKGF1dest23)的基因工程菌,为治疗放化疗后口腔黏膜炎的新药开发提供实验数据.方法:利用PCR方法分别以pET3c-hKGF1及sumo-EGF为模板合成N端缺失的23个氨基酸rhKGF1 dest23及sumo基因片段,构建4种原核表达载体pET22b-rhKGF1dest23﹑pET22b-sumo-rhKGF1dest23﹑pET3c-rhKGF1dest23和pET3c-sumo-rhKGF1dest23,分别转化原核表达宿主菌Rosetta(DE3) plysS、BL21(DE3) 、BL21(DE3)Star plysS、origima(DE3) 和BL21AI,筛选rhKGF1dest23蛋白表达的最佳质粒与宿主菌组合.CM离子交换和肝素亲和层析法纯化rhKGF1dest23蛋白,Western blotting法鉴定rhKGF1dest23蛋白.结果: pET22b-rhKGF1dest23质粒与BL21AI 宿主菌为最佳组合表达,经IPTG与阿拉伯糖诱导,SDS-PAGE电泳后表明目的蛋白大部分以可溶性形式存在,约占菌体总蛋白的10%,经CM和肝素两步纯化后rhKGF1dest23蛋白纯度为95%以上,Western blotting法鉴定为rhKGF1dest23蛋白.结论:成功构建表达人KGF1dest23重组蛋白的基因工程菌,经IPTG与阿拉伯糖诱导,CM弱阳离子与肝素亲合层析后,得到了纯化的rhKGF1dest23蛋白.