枣cDNA-AFLP技术体系建立与优化

• 作者: 刘孟军 宋蓓 李庄 赵锦
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 枣 cDNA-AFLP 优化
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 页码范围: 46-51
• 分类号: S665.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-1573.2010.03.011

摘要

建立了枣(Ziziphus jujuba Mill.)cDNA-AFLP分析的优化体系和反应程序.提取获得的总RNA以人工合成的Oligo(dT)18为引物,利用鼠源反转录酶(M-MLV RT)合成cDNA第1链,合成双链cDNA后用限制性内切酶EcoR Ⅰ(识别6个碱基位点)与Mse Ⅰ(识别4个碱基位点)酶切,酶切连接后,使用与接头序列互补的预扩引物对cDNA片段池进行PCR扩增,扩增后的cDNA池定量至1 ng/μL,作为选择性扩增的模板,优化得到的选扩反应体系为:20 μL的反应体系中含5 μL模板,2 μL 10×PCR buffer,2μL MgCl2(25 mmol/L),EcoRⅠ特异性引物(50 ng/μL)1 μL,MseⅠ特异性引物(50 ng/μL)1 μL,10 mmol/L dNTP 0.4μL,5U Taq DNA Polymerase 0.12μL.选扩程序:94 ℃预变性2 min;94 ℃变性30 s,65 ℃退火30 s(每个循环降0.7 ℃),72 ℃延伸1 min,13个循环;94 ℃变性30 s,56 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,31个循环;72 ℃ 7 min.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵锦	河北农业大学生命科学学院	80	1277	21.0	32.0
2	刘孟军	河北农业大学中国枣研究中心	195	3609	34.0	49.0
3	宋蓓	河北农业大学生命科学学院	2	62	2.0	2.0
4	李庄	河北农业大学生命科学学院	1	2	1.0	1.0