小麦叶片cDNA-AFLP扩增反应体系的优化

• 作者: 张跃强 曲延英 李剑峰 樊哲儒 王岩军 王浩 范玲
• 来源期刊: 新疆农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 小麦叶片 cDNA-AFLP 预扩增 选择性扩增 体系优化
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 页码范围: 489-494
• 页数: 6页
• 分类号: S1898|S512.1
• 字数: 3490字
• 语种: 中文

摘要

[目的]建立并优化小麦叶片cDNA-AFLP扩增反应体系,进行cDNA-AFLP分析,挖掘新春6号相关抗旱基因.[方法]在盆栽小麦苗期水分胁迫下叶片cDNA-AFLP的试验中,分别对20 μL预扩增和选择性扩增反应体系中的4种反应条件影响因子进行不同梯度优化的研究,包括引物、dNTP、Mg2+及TaqDNA聚合酶的用量.[结果]PCR预扩增20 μL反应体系中,引物(40 mM)1.0 μL、dNTP(2.5 mM)1.8 μL、Mg2+(25 mM)2.2 μL、TaqDNA聚合酶(5U)0.5 μL时预扩增效果较好;PCR选择性扩增20 μL反应体系中,引物(40 mM)0.6 μL、dNTP(2.5 mM)2.0 μL、Mg2+(25 mM)1.6 μL、TaqDNA聚合酶(5U)0.4 μL时,可得到更多清晰可辨的TDFs(transcript derived fragments).[结论]试验通过对引物、dNTP、Mg2+ 、TapDNA聚合酶用量等因子进行筛选,获得较为理想的预扩增和选择性扩增体系,得到了更多有效的条带,为利用cDNA-AFLP研究小麦抗旱相关基因的分离及其克隆奠定了良好的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曲延英	新疆农业大学农学院	135	726	13.0	19.0
2	王浩	新疆农业科学院核技术生物技术研究所	53	277	10.0	15.0
3	范玲	新疆农业科学院核技术生物技术研究所	43	483	12.0	20.0
4	樊哲儒	新疆农业科学院核技术生物技术研究所	23	102	7.0	10.0
5	李剑峰	新疆农业科学院核技术生物技术研究所	22	81	6.0	8.0
6	张跃强	新疆农业科学院核技术生物技术研究所	22	52	5.0	6.0
7	王岩军	新疆农业科学院核技术生物技术研究所	17	42	4.0	6.0