RegIα cDNA过表达质粒的构建及对胃癌细胞增殖凋亡的影响

• 作者: 周群燕 姒健敏 王良静 陆晓凤
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 胃肿瘤 再生/遗传学 细胞系,肿瘤 逆转录聚合酶链反应 遗传载体 质粒 细胞凋亡 细胞增殖 转染
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 499-505
• 分类号: Q78
• 字数: 4981字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2010.05.010

摘要

目的:构建再生蛋白Iα(regeneration gene Iα,RegIα)的cDNA过表达质粒表达载体,在体外评价其对胃癌细胞株增殖及其凋亡的影响.方法:根据RegIα cDNA的全序列设计引物,用RT-PCR的方法从胃黏膜组织的总RNA中获取RegIα的cDNA编码区域的全序列,经测序其与目的基因序列一致.将获取的RegIα序列经TA克隆和亚克隆至pIRES2-EGFP真核表达质粒载体中;将构建的RegIα过表达质粒载体pIRES2-RegIα-EGFP转染胃癌细胞株MKN28,并用空载体pIRES2-EGFP作为对照,利用G418筛选稳定表达pIRES2-RegIα-EGFP的MKN28细胞株.通过RT-PCR及Western blot检测转染后细胞RegIα在mRNA及蛋白质水平的表达;MTT法和流式细胞仪分别检测RegIα过表达后MKN28细胞增殖及拮抗H2O2诱导凋亡的变化.结果:成功构建RegIα cDNA的全序列表达质粒.RT-PCR及Western blot检测显示:转染pIRES2-EGFP质粒的MKN28细胞RegIα mRNA及蛋白表达水平明显升高(P<0.05);MTT试验显示:转染后细胞增殖能力明显升高(P<0.05),而且拮抗H2O2凋亡的能力增强(P<0.05).结论:RegIα的过表达能明显增强胃癌细胞MKN28的增殖和拮抗H2O2诱导凋亡的能力.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	姒健敏	浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠病实验室	108	1092	21.0	26.0
2	王良静	浙江大学医学院附属第二医院消化内科	33	299	9.0	16.0
3	陆晓凤	浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠病实验室	2	8	2.0	2.0
4	周群燕	浙江大学邵逸夫临床医学研究所胃肠病实验室	1	3	1.0	1.0