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miR-21真核表达载体的构建及其对胃癌细胞增殖与凋亡的影响
miR-21真核表达载体的构建及其对胃癌细胞增殖与凋亡的影响
作者:
丁骏△
周晓丽
孙阳阳
朱逸之
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
胃肿瘤
微小RAN-21
增殖
凋亡
摘要:
目的探讨人微小 RNA-21(miR-21)重组表达质粒对人胃癌 SGC-7901细胞增殖与凋亡的影响及可能机制.方法设计合成靶向 miR-21的互补双链 DNA,退火后与真核表达载体 pPG-miR-EGFP 克隆连接,构建 pPG-miR-21-EGFP 重组表达质粒,利用脂质体 LipofectamineTM2000将鉴定正确的重组表达质粒 pPG-miR-21-EGFP 转染人胃癌 SGC-7901细胞,荧光显微镜下观察转染效率.实验分为3组:空白对照组、空载体组、重组表达质粒组.以 RT-PCR 检测转染前后胃癌细胞 miR-21的表达水平.MTT 法评价重组表达质粒抑制肿瘤细胞生长的效果,流式细胞术及 Hoechst 33258法检测转染后胃癌 SGC-7901细胞周期的分布和凋亡.Western blot 法、免疫细胞化学法分别检测转染前后 PTEN、PCNA、PDCD4、bcl-2、cyclin D1蛋白表达的水平.结果酶切及测序鉴定证实成功构建重组质粒 pPG-miR-21-EGFP,转染人胃癌 SGC-7901细胞后,荧光显微镜下观察转染效率达75%.RT-PCR 检测显示重组表达质粒组胃癌细胞 miR-21的表达下调,与空白对照组和空载体组比较,差异具有统计学意义(P<0.05).Western blot 法、免疫细胞化学法检测结果显示重组表达质粒组胃癌细胞 cyclin D1、PCNA、bcl-2蛋白的表达下调(P<0.05),而 PDCD4、PTEN 蛋白的表达上调(P<0.05).重组表达质粒组的细胞生长缓慢,凋亡指数增加.流式细胞术检测结果显示重组表达质粒组 G1期细胞的百分比较空白对照组增加[(69.71±0.314)% vs(50.1±0.331)%],S 期细胞较空白对照组明显减少[(14.68±0.448)% vs(28.47±0.316)%](P<0.05).结论重组表达质粒 pPG-miR-21-EGFP 可显著下调 miR-21在胃癌 SGC-7901细胞中的表达,并在一定程度上抑制胃癌细胞的增殖,促进其凋亡,使较多的细胞停留在 G1期,S 期细胞减少,其作用机制可能是通过下调 cyclin D1、PCNA、bcl-2蛋白的表达,上调 PDCD4、PTEN 蛋白的表达而实现的.
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文献信息
篇名
miR-21真核表达载体的构建及其对胃癌细胞增殖与凋亡的影响
来源期刊
中国癌症防治杂志
学科
医学
关键词
胃肿瘤
微小RAN-21
增殖
凋亡
年,卷(期)
2013,(1)
所属期刊栏目
研究方向
页码范围
6-11
页数
分类号
R735.2
字数
5904字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1674-5671.2013.01.02
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
孙阳阳
213003 常州 南京医科大学附属常州市第二人民医院病理科
1
3
1.0
1.0
2
丁骏△
南京医科大学附属常州市第二人民医院肿瘤中心实验室
1
3
1.0
1.0
3
周晓丽
213003 常州 南京医科大学附属常州市第二人民医院病理科
1
3
1.0
1.0
4
朱逸之
213003 常州 南京医科大学附属常州市第二人民医院病理科
1
3
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1.0
传播情况
被引次数趋势
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参考文献
(14)
节点文献
引证文献
(3)
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(8)
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参考文献(0)
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2013(2)
参考文献(2)
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二级引证文献(0)
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研究主题发展历程
节点文献
胃肿瘤
微小RAN-21
增殖
凋亡
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国癌症防治杂志
主办单位:
中国医师协会
广西肿瘤防治研究所
出版周期:
双月刊
ISSN:
1674-5671
CN:
45-1366/R
开本:
大16开
出版地:
广西南宁市河堤路71号
邮发代号:
48-33
创刊时间:
1984
语种:
chi
出版文献量(篇)
1488
总下载数(次)
0
总被引数(次)
4544
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