北京油鸡purH基因结构与表达特征研究

• 作者: 关伟军 刘帅 刘长青 包阿东 郭俣 陆涛峰 马月辉
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 北京油鸡 purH基因 荧光蛋白 成纤维细胞 基因表达
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 339-346
• 分类号: Q344.13|Q786
• 字数: 5832字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2010.03.010

摘要

提取北京油鸡8种组织的总RNA,利用RT-PCR检测purH基因mRNA的差异表达.将purH基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-N3,构建带有GFP报告基因重组表达载体pEGFP-purH,利用脂质体介导法将其导入北京油鸡体外培养细胞中,进行G418药物筛选和克隆化培养.结果表明:北京油鸡purH基因(GenBank登录号:EU334506)编码区为1 782 bp,编码593 aa的多肽,转染后24 h、48 h和72 h,pEGFP-purH转染率在10.3%～53.2%之间,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中,随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状.经药物筛选和克隆化培养,获得表达pEGFP-purH融合蛋白的克隆细胞株,RT-PCR与Western blotting检测确认pEGFP-purH已整合到北京油鸡成纤维细胞基因组中,在优化的条件下,阳性细胞凋亡率、生长与增殖状况与对照组比较差异不显著(P＞0.05).