北京油鸡ADSL基因的克隆、表达及其结构与功能分析

• 作者: 关伟军 刘帅 刘长青 包阿东 吴宏梅 唐学玺 张洪海 陆涛峰 马月辉
• 来源期刊: 动物学研究
• 学科: 生物学
• 关键词: 北京油鸡 腺苷酸琥珀酸裂解酶 结构分析 基因表达
• 年，卷（期）: 2008,（4）
• 所属期刊栏目: 分子生物学与进货
• 页码范围: 353-362
• 页数: 10页
• 分类号: Q344.13:Q786|Q959.725
• 字数: 7565字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0254-5853.2008.04.001

摘要

采用RT-PCR与RACE方法扩增出北京油鸡腺苷酸琥珀酸裂解酶(ADSL)基因全长cDNA序列,亚克隆和序列分析结果表明:该基因开放阅读框长为1455个碱基,编码485个氨基酸;5'端非转录调控区具有典型管家基因的特征,在临近起始密码子27号碱基发生C→T突变,该突变使得本来小是核呼吸因子2(NRF-2)结合位点的CTCC突变为NRF-2结合位点CTTC.将ADSL基因完整斤放阅读框重组至融合表达载体pGEX-4T-l中,构建成北京油鸡ADSL基因融合表达载体pOEX-ADSL,转化大肠杆菌BL21(DE3),筛选阳性克隆,IPTG诱导表达.经SDS-PAGE电泳显示重组融合蛋白在约80.5kD处有特异蛋白条带出现,与预期分子量大小一致,等电点为6.79.该蛋白的表达最随诱导时间的延长而增加,5h达最高值,达到细胞总蛋白的26.9%,且主要以不可溶的包涵体形式存在,经优化表达条件,成功地获得了可溶性的融合蛋白,经Glutathione Sepharase 4B凝胶纯化后Western blotting检测表明其为北京油鸡ADSL蛋白,为其进一步的生物学功能及其应用研究鉴定基础.