北京油鸡cDNA文库的构建及purH基因的表达

• 作者: 佟春玲 修晓娜 关伟军 刘长青 郭俣 陆涛峰 马月辉
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 北京油鸡 SMART cDNA文库 purH基因
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 93-99
• 分类号: Q344+.13|Q786
• 字数: 5212字
• 语种: 中文

摘要

利用SMART技术构建了北京油鸡肝脏全长cDNA文库,构建的未扩增文库滴度为1.96×106pfu·mL-1,文库重组率为92.8%,插入片段长度为1.23 kb,扩增文库滴度为1.64×1010pfu·mL-1.设计purH基因保守引物对该文库进行筛选,克隆了北京油鸡purH基因(GenBank登录号:EU334506),将purH基因完整开放阅读框定向插入pEGFP-N3,构建带有GFP报告基因重组表达载体pEGFP-N3-purH,将其导入北京油鸡体外培养细胞中.转染后24、48和72 h,pEGFP-N3-purH转染率为10.3%～53.2%,绿色荧光均匀分布于细胞质与细胞核中.随表达量的增加,绿色荧光在细胞核中聚集成团块状或颗粒状.结果表明,构建的北京油鸡肝脏组织cDNA文库符合建库要求.