小反刍兽疫病毒N基因重组杆状病毒的构建及间接ELISA抗体检测方法的建立

• 作者: Hermann Unger 吴晓东 张坤 李伟 李刚 邱文英
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 小反刍兽疫病毒 杆状病毒 昆虫细胞 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2010,（9）
• 页码范围: 1147-1153
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 5152字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在建立基于真核表达的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白的诊断小反刍兽疫的间接ELISA方法.利用Bac-to-Bac杆状病毒-昆虫表达系统,构建含有PPRV N基因的重组供体质粒pFastBacHTA-N,转化E.coli DH10Bac感受态细胞,得到重组穿梭质粒pBacmid-PPRV-V,转染昆虫细胞Sf21,获得含有PPRV N基因的重组杆状病毒.用重组病毒感染昆虫细胞后,SDS-PAGE鉴定出60 ku左右的表达蛋白,Western blot检测该蛋白具有很好的反应原性.以重组Bacmid-PPRV-N蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA检测方法.临床检测来自西藏疫区的37份山羊血清和来自青海省非疫区的92份山羊血清,与法国蒙彼利埃农学发展研究国际合作中心(CIRAD-EMVT)提供的竞争ELISA试剂盒相比较,特异性为96.2%,敏感性为100%,二者的符合率达到96.9%.结果表明本研究建立的间接ELISA方法可以很好地用于小反刍兽疫的临床诊断.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李刚	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物分子营养学国家重点实验室	111	742	14.0	23.0
2	李伟	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物分子营养学国家重点实验室	190	2617	29.0	41.0
3	张坤	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物分子营养学国家重点实验室	12	96	6.0	9.0
4	邱文英	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物分子营养学国家重点实验室	7	58	5.0	7.0
5	吴晓东	中国动物卫生与流行病学中心外来病诊断中心	53	281	10.0	14.0