短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因的随机突变

• 作者: 万民远 冯红 张义正 张晓露 杨锦 焦惠科
• 来源期刊: 应用与环境生物学报
• 学科: 地球科学
• 关键词: 碱性蛋白酶 短小芽孢杆菌 定向进化 易错PCR 序列分析 基因表达
• 年，卷（期）: 2010,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 96-99
• 页数: 4页
• 分类号: Q939.106|X172
• 语种: 中文

摘要

碱件蛋白酶(DHAP)属于丝氨酸蛋门酶家族(S8A),是由275个氨基酸残基组成的单链多肽,没有二硫键,以Asp32、His64、Ser221作为活性中心.采用易错PCR方法,对短小芽孢杆菌碱性蛋白酶基因(GenBank登录号:AY458140)进行随机突变.在大肠杆菌中建立随机突变文库,然后转化枯草芽孢杆菌WB600,构建枯草芽孢杆菌突变文库,筛选出酶活性提高或最适反应温度和pH值有所降低的突变体.通过3轮的随机突变和筛选,获得2个阳性突变体pP43AP-M166和pP43AP-M375.其中pP43AP-M166在不同的温度和pH条件下,与出发菌株相比,酶活都有不同程度提高,特别是当反应温度为50℃、pH为10时,突变蛋白酶酶活性提高1.23倍,表现出很好的热稳定性.测序结果表明,该突变体含有一个氨基酸置换,位于碱性蛋白酶催化三联体活性中心His64旁,与其只有一个氨基酸残基相隔.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张义正		150	2059	26.0	38.0
2	冯红		8	19	3.0	4.0
3	杨锦		6	37	3.0	6.0
4	万民远		1	0	0.0	0.0
5	焦惠科		1	0	0.0	0.0
6	张晓露		1	0	0.0	0.0