多粘类芽胞杆菌菌株M-1启动子片段的克隆及绿色荧光蛋白的表达

• 作者: 梅汝鸿 王爽 王琦 赵婧婧
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 多粘类芽胞杆菌 蜡样芽胞杆菌 启动子 gfp标记
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 788-792
• 分类号: S3
• 字数: 3115字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2010.04.026

摘要

应用启动子探针载体pECE7,从多粘类芽胞杆菌(Panebacillus polymyxa)菌株M-1基因组克隆到一系列启动子活性片段,通过氯霉素(chloramphenicol chloromycetin,Cm)浓度梯度筛选出Cm抗性较强的3个片段.将这3个具有启动子活性的片段与来自GFP表达载体pGFP78的gfpmut3a基因插入Escherichia coli-Bacillus穿梭载体pHY300PLY中,获得GFP表达载体pGFP5,pGFP8和pGFP17.通过热激转化E.coli DH5α,荧光显微镜下观察到明亮的绿色荧光,表明筛选到的启动子片段具有良好的启动外源基因gfp转录的功能.同时利用此表达载体标记本实验筛选得到的生防蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)菌株B905,获得了GFP标记的工程菌Bacillus cereus B905(gfp-5、gfp-8和gfp-17),通过荧光显微镜观察,发现转入GFP表达载体pGFP5和pGFP8后,菌体有明亮的绿色荧光,而转入pGFP17的菌体荧光相对较弱.