猪繁殖与呼吸综合征病毒Nsp2的原核表达及单克隆抗体的制备

• 作者: 严玉霖 孙文汇 杨建发 赵汝 陈培富 陈玲 高利波 高洪
• 来源期刊: 西南农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪繁殖与呼吸综合征病毒 非结构蛋白2 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 1683-1688
• 分类号: S828
• 字数: 3746字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-4829.2010.05.063

摘要

以猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)为模板,通过RT-PCR扩增编码非结构蛋白2 (Nsp2)的基因,插入到pET32a表达载体中并在大肠埃希氏菌中进行表达.SDS-PAGE电泳结果显示融合表达的Nsp2分子量约为68 kDa,Western blotting分析该融合蛋白能与PRRSV阳性血清发生特异性反应.纯化融合表达产物Nsp2,按100 μg/只的剂量与等量弗氏佐剂乳化,经腹腔免疫BALB/c小鼠3次后,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,分别以Nsp2和His-Tag为抗原,通过间接EL ISA方法对融合细胞的上清液进行检测,筛选阳性克隆.经过3次亚克隆后,最终得到了6株能稳定分泌抗Nsp2抗体的阳性细胞克隆株.间接免疫荧光试验、Western blotting和间接ELISA试验鉴定这6株单克隆抗体均能够特异、单一地识别Nsp2,亚型鉴定结果显示6株单抗均属IgG2a型,其轻链均为κ链.所制备的这些单抗将为鉴定PRRSV Nsp2的B细胞抗原表位以及分析该蛋白的结构和功能奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高洪	云南农业大学动物科学技术学院	163	1433	16.0	33.0
2	杨建发	云南农业大学动物科学技术学院	94	288	8.0	12.0
3	严玉霖	云南农业大学动物科学技术学院	107	733	11.0	24.0
4	陈培富	云南农业大学动物科学技术学院	44	165	5.0	12.0
5	高利波	云南农业大学动物科学技术学院	37	156	7.0	11.0
6	陈玲	云南农业大学动物科学技术学院	13	56	4.0	7.0
7	孙文汇	云南农业大学动物科学技术学院	7	102	3.0	7.0