酪氨酸羟化酶重组质粒标准品构建

• 作者: 刘燕 彭聿平 邱一华 黄彦 黄慧伟
• 来源期刊: 交通医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 酪氨酸羟化酶 pGEM-T载体 T-A克隆法 实时定量聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 463-465
• 分类号: Q55
• 字数: 2552字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-2440.2010.05.001

摘要

目的:用T-A克隆法构建含酪氨酸羟化酶(TH)基因的重组质粒,并用实时定量PCR(RQPCR)方法制备标准品.方法:提取小鼠肾上腺髓质组织总RNA,逆转录为cDNA后进行RT-PCR,回收纯化电泳胶,T-A克隆与pGEM-T载体连接,转化Top-10感受态细菌,蓝白斑筛选出阳性菌落后,大量提取质粒,再进行RQPCR反应,最后制得含TH的重组质粒标准品.结果:肾上腺髓质TH的表达,PCR扩增,菌液PCR,测序鉴定均证实TH重组到pGEM-T载体上,经RQPCR定量后得到TH重组质粒标准品的标准曲线.结论:该方法能大量制备TH质粒标准品,并且可推广应用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘燕	南通大学医学院诊断学教研室	16	27	3.0	4.0
2	彭聿平	南通大学医学院生理学教研室	51	295	9.0	16.0
3	黄彦	南通大学医学院生理学教研室	13	29	3.0	5.0
4	黄慧伟	南通大学医学院生理学教研室	11	31	3.0	5.0
5	邱一华	南通大学医学院生理学教研室	64	340	9.0	16.0