重组人凝血因子Ⅶ的纯化与鉴定

• 作者: 冯晶晶 吕茂民 王卓 章金刚
• 来源期刊: 中国输血杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 亲和层析 重组人凝血因子Ⅶ(rhFⅦ) 纯化 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 所属期刊栏目: 血液制品研发专题
• 页码范围: 252-255
• 分类号: R392.33|Q784|R457.1
• 语种: 中文

摘要

目的 建立重组人凝血因子Ⅶ(rhFⅦ)的纯化方法.方法 首先将制备并纯化的单克隆抗体与CNBrSepharose 6B Fast Flow介质偶联,制备单克隆抗体亲和层析柱,并用rhFⅦ品验证层析柱的层析效果;采用DEAE-Sephadex A-50吸附细胞表达的上清,对吸附产物用Sephadex G-25脱盐桂做脱盐处理;然后用单克隆抗体亲和层析柱做亲和层析;通过SDS-PAGE、Western Blot等试验测定纯化产物的纯度;通过凝血酶原时间(PT)测定纯化产物的促凝活性.结果 制备出rhFⅦ单克隆抗体亲和层析介质;细胞表达产物经DEAE-Sephadex A-50、Sephadex G-25脱盐和亲和层析纯化后,经SDS-PAGE鉴定获得了分子量为50 kD的单一蛋白洗脱峰;纯化所获得的重组蛋白具有促凝活性,促凝时间(DT)为52 s.结论 建立了纯化rhⅦ的亲和层析方法,为rhFⅦ的研制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕茂民	军事医学科学院野战输血研究所	56	376	11.0	16.0
2	章金刚	军事医学科学院野战输血研究所	124	845	15.0	21.0
3	王卓	军事医学科学院野战输血研究所	10	101	4.0	10.0
4	冯晶晶	军事医学科学院野战输血研究所	5	15	3.0	3.0