人凝血因子Ⅶ重组腺病毒载体的构建及鉴定

• 作者: 何悦 吕茂民 揭飞龙 李红卫 王升尧 章金刚 颜仁和
• 来源期刊: 军事医学
• 学科: 生物学
• 关键词: 人凝血因子Ⅶ 重组腺病毒载体 哺乳动物细胞 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2015,（3）
• 所属期刊栏目: 血液制品
• 页码范围: 203-205
• 页数: 3页
• 分类号: Q51
• 字数: 2218字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7644/j.issn.1674-9960.2015.03.011

摘要

目的：构建表达人凝血因子Ⅶ（FⅦ）的重组腺病毒载体，利用腺病毒载体介导哺乳动物细胞表达重组人凝血因子Ⅶ（rhFⅦ）。方法利用BamHⅠ和EcoR Ⅴ双酶切pcDNA 3．1－FⅦ载体得到FⅦ基因片段，补平后，插入经SalⅠ单酶切、补平并去磷酸化处理的加强型绿色荧光蛋白（ GFP）表达盒的pAdTrack－CMV腺病毒穿梭载体，构建pAdTrack－CMV－FⅦ，继而进行酶切和测序鉴定；经PmeⅠ单酶切线性化后，pAdTrack－CMV－FⅦ在BJ5183感受态菌内与pAdEasy－1腺病毒骨架发生同源重组，构建重组表达FⅦ的腺病毒质粒pAd－FⅦ；经PacⅠ酶切后的pAd－FⅦ，使用PEI试剂转染293 A细胞，包装表达FⅦ的重组腺病毒Ad－FⅦ；利用Western 印迹检测重组腺病毒Ad－FⅦ介导293 A细胞表达FⅦ的蛋白水平；通过观察EGFP的表达来判断质粒转染及病毒感染细胞的效率。结果经酶切和测序鉴定，FⅦ克隆到pAdTrack－CMV腺病毒穿梭载体中，获得重组质粒pAdTrack－CMV－FⅦ；将其与pAdEasy－1在细菌内发生同源重组，成功获得FⅦ重组腺病毒质粒pAd－FⅦ；在293A细胞内包装重组腺病毒，Western印迹检测到FⅦ蛋白的表达。结论成功构建重组腺病毒Ad－FⅦ，并实现了rhFⅦ在哺乳动物细胞中的表达，为利用哺乳动物细胞表达rhFⅦ的研究奠定了基础。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吕茂民	军事医学科学院野战输血研究所	56	376	11.0	16.0
2	章金刚	军事医学科学院野战输血研究所	124	845	15.0	21.0
3	揭飞龙	南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所	2	2	1.0	1.0
4	李红卫	南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所	8	43	2.0	6.0
5	王升尧	南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所	1	0	0.0	0.0
6	颜仁和	南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所	2	3	1.0	1.0
7	何悦	南方医科大学生物技术学院生物治疗研究所	2	0	0.0	0.0