烟草中TMV、CMV和PVY多重RT-PCR检测体系的建立与应用

• 作者: 张帅 杨金广 王凤龙 王长栓 申莉莉 钱玉梅 陈德鑫 黄瑾
• 来源期刊: 中国烟草学报
• 学科: 农学
• 关键词: 烟草 多重RT-PCR 病毒检测 应用
• 年，卷（期）: 2010,（4）
• 页码范围: 83-88
• 分类号: S432.41
• 字数: 4637字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5708.2010.04.017

摘要

利用DNAMAN软件对GenBank数据库中已登录的烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus,TMV)、黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)全基因组序列进行序列比对,选择最保守的区域,进行相应病毒的引物设计,建立了多重RT-PCR检测烟草中TMV、CMV和PVY的技术体系.对3条扩增片段进行回收、测序和BLAST比较,结果表明多重RT-PCR所扩增的片段序列均与预期设计序列相符,同源性均在98%以上.利用多重RT-PCR对广西区132个烟草病毒病样品进行检测分析,结果表明TMV检出率为91.7%,CMV检出率为18.2%,PVY检出率为55.3%.较单一的RT-PCR,具有简便、快速和经济的特点.与酶联免疫吸附法(Enzyme Linked Immunosorbent Ashy,ELISA)相比,其检测限度高出ELISA的检测限度104级数,具有更高的特异性与准确性.该方法可以同步快速、特异地检测出烟草中TMV、CMV和PVY病毒的侵染.