猪星状病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR检测方法的建立与初步应用

• 作者: 华修国 商晓桂 崔立 朱建国 杨志彪 杨莲茹 郭伟
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: SYBR Green Ⅰ 猪星状病毒 检测
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 1049-1053
• 分类号: S852.659.6
• 字数: 3635字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在建立一种能够快速、简便、灵敏地检测猪星状病毒的基于SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法.根据已报道的猪星状病毒ORF2基因序列,设计并合成1对引物,通过PCR扩增ORF2基因片段,将测序正确的ORF2基因片段克隆入pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,经测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为标准品模板建立SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR标准曲线和熔解曲线,并对其灵敏性、特异性和重复性进行验证.结果表明,猪星状病毒荧光定量PCR的标准曲线Ct值与模板浓度呈良好的线性关系,熔解曲线特异,灵敏度可达1×101拷贝,是普通PCR检测方法的100倍,特异性和重复性较好.本次建立的猪星状病毒荧光定量PCR检测方法具有快速、简便、敏感等优点,有重要的实用价值.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱建国	上海交通大学农业与生物学院	103	607	13.0	20.0
2	华修国	上海交通大学农业与生物学院	155	1291	18.0	27.0
3	杨志彪	上海交通大学农业与生物学院	33	184	9.0	12.0
4	杨莲茹	内蒙古农业大学动物医学与科学学院	57	476	13.0	18.0
5	郭伟	上海交通大学农业与生物学院	26	150	7.0	11.0
9	商晓桂	上海交通大学农业与生物学院	4	39	3.0	4.0