日本血吸虫毛蚴侵袭前后湖北钉螺差异表达cDNA文库的构建与分析

• 作者: 刘琴 周晓农 张仪 李石柱
• 来源期刊: 中国血吸虫病防治杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 湖北钉螺 日本血吸虫 抑制消减杂交 差异表达cDNA文库
• 年，卷（期）: 2010,（6）
• 页码范围: 539-543
• 分类号: R383.24
• 字数: 3628字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-6661.2010.06.005

摘要

目的 构建湖北钉螺被日本血吸虫毛蚴侵袭前、后差异表达cDNA文库,筛选湖北钉螺免疫相关分子,为探讨病原与中间宿主的相互作用奠定基础.方法 提取被日本血吸虫毛蚴侵袭前、后湖北钉螺的头足部组织总RNA,纯化mRNA,反转录合成cDNA.分别以被日本血吸虫毛蚴侵袭前湖北钉螺(未处理组)和被日本血吸虫毛蚴侵袭后湖北钉螺(处理组)的头足部组织作为检测方(Tester)和驱动方(Driver),利用PCR方法选择cDNA杂交试剂盒分别进行正向和反向抑制性消减杂交.将获得的正向抑制性消减杂交产物克隆入pGEM-T载体,重组质粒转入E.coli DH5a,对菌液用PCR法扩增鉴定其中的插入片段.随机抽取354个阳性克隆进行DNA序列分析,将所得表达序列标签(ESTs)序列在线进行BLAST分析.结果 从正向文库随机挑取的354个阳性克隆中测得350个ESTs序列,生物信息学分析发现了34个湖北钉螺新基因,其中1个与已知基因部分同源.结论 成功建立了被日本血吸虫侵袭前、后湖北钉螺差异表达片段cDNA消减文库,发现了湖北钉螺新基因,为筛选与湖北钉螺天然免疫相关的分子、进一步探讨中间宿主与病原的相互作用及筛选血吸虫病传播阻断疫苗候选分子奠定了基础.