人外周血单核细胞的分离和电穿孔法转染

• 作者: 巩伟丽 李涛 满江红 靳宝锋
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 外周血 单核细胞 分离 电穿孔转染
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 673-676
• 分类号: Q78|R392.1
• 字数: 2474字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2010.05.017

摘要

目的:建立分离纯化人外周血单核细胞及转染的有效方法.方法:应用基于HISTOPAQUE的密度梯度离心及抗体标记纯化的方法分离单核细胞,并以电穿孔技术转染绿色荧光蛋白(GFP)表达质粒、肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)小干扰RNA.结果:基于外周血单核细胞的表面标志分子CD14的流式细胞分析表明得到了高纯度(89.95%)的外周血单核细胞;GFP荧光照片显示GFP表达质粒的转染效率为60%～70%;免疫印迹显示TRAF6的表达抑制(>90%)下调了脂多糖(LPS)对JNK的激活,说明通过电穿孔技术有效递送了TRAF6小干扰RNA,表明单核细胞若缺少TRAF6将抑制LPS-TLR4信号通路的激活.结论:建立了一种高效的从人外周血中分离原代单核细胞的方法,且应用基于NucleoFectorⅡ的电穿孔技术实现了对此原代单核细胞的高效转染,为进一步外周血单核细胞的相关功能研究奠定了方法学基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	巩伟丽		22	150	6.0	12.0
2	李涛		6	21	3.0	4.0
3	满江红		13	21	3.0	4.0
4	靳宝锋		4	10	2.0	3.0