质粒DNA转染人PBMC电穿孔条件的影响因素

• 作者: 于洋 孔明圣 张亚倩 张文峰 李玲 邵红伟
• 来源期刊: 广东药科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 电穿孔 转染 PBMC 质粒
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 医学研究
• 页码范围: 289-295
• 页数: 7页
• 分类号: Q523
• 字数: 5005字
• 语种: 中文
• DOI: 10.16809/j.cnki.2096-3653.2019030105

摘要

目的 分析影响质粒转染人PBMC电穿孔效率的不同因素.方法 从人外周血中分离得到PBMC,利用携带荧光标记的质粒进行电穿孔转染.分别比较不同的电压、脉冲时间、电转缓冲液、细胞培养状态、质粒质量对转染效率和细胞活率的影响.结果 在一定范围内适当增高电压会增加细胞转染效率,但会降低细胞活率;脉冲时间达到一定数值后,转染效率才会有明显的升高;电转缓冲液对于电转后细胞存活率至关重要;未活化的PBMC转染效率低于经刺激活化的PBMC,但细胞活率却高于后者;质粒纯度和质量显著影响电穿孔转染效果,利用全波长光谱扫描仪可对质粒的杂质进行有效的检测,质粒中内毒素的含量显著影响PBMC电转后的存活率.结论 对质粒转染人PBMC的电穿孔条件进行了详细的分析与探索,阐明了影响原代淋巴细胞转染的多种因素,对于有效提高人原代淋巴细胞转染效率具有重要意义,为基于淋巴细胞的肿瘤免疫研究提供有益参考.