人前列腺特异性膜抗原胞外区基因重组腺病毒的构建

• 作者: 刘东山 刘修恒 匡幼林 江波涛 沈昊 祝恒成 翁小东 陈志远 陈晖
• 来源期刊: 武汉大学学报(医学版)
• 学科: 医学
• 关键词: 前列腺特异性膜抗原 基因表达 腺病毒
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 技术与方法研究
• 页码范围: 255-258
• 页数: 4页
• 分类号: R737.25
• 语种: 中文

摘要

目的:体外构建和表达人前列腺特异性膜抗原胞外区(tPSMA)基因重组腺病毒.方法:首先设计一对含BglⅡ和HindⅢ酶切位点的tPSMA引物,以质粒pCR3.1-Uni-hPSMA为模板,通过PCR扩增tPSMA并克隆到腺病毒穿梭质粒中,获得pAdTrack-CMV-tPSMA质粒,将其与含有pAdeasy-1的BJ5183菌电转化,筛选阳性克隆,重组子经线性化后转染HEK293细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达、RT-PCR、Western blot法检测目的基因tPSMA的表达.结果:成功构建了含tPSMA的重组腺病毒载体Ad-tPSMA,病毒滴度为2.0×10"pfu/L.结论:该重组腺病毒的构建为下一步研究用其制备树突状细胞疫苗基因治疗提供基础.