大肠杆菌菌株ATCC 25922碱性磷酸酶的原核表达、纯化及其活性研究

• 作者: 张润祥 李雪萌 王君伟 高明春
• 来源期刊: 东北农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 大肠杆菌碱性磷酸酶 ATCC 25922 表达纯化 活性鉴定
• 年，卷（期）: 2010,（8）
• 页码范围: 48-53
• 分类号: S855.3
• 字数: 3185字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-9369.2010.08.011

摘要

使用常规PCR法以大肠杆菌菌株ATCC 25922基因组为模板,克隆到该菌株的碱性磷酸酶成熟肽基因,并将其构建到原核表达载体pET-30a(+)的Bam H Ⅰ、Xho Ⅰ之间,获得重组表达载体pET-30a-EAP.并且我们将pET-30a-EAP转化到大肠杆菌RosettaTM(DE3)pLysS中,经IPTG诱导表达后,获得大小为52 ku的目的蛋白EAP.经试验证明该蛋白以可溶形式为主.进而,高效表达的重组碱性磷酸酶经亲和层析法纯化后被用于活性鉴定.pNPP的显色反应与去磷酸化试验证实来自ATCC 25922的重组碱性磷酸酶具有催化磷酸单酯水解活性,而且酶热稳定性高、有效工作温度范围大,与其他蛋白融合表达时仍保持酶活性.以上研究结果为大肠杆菌菌株ATCC 25922碱性磷酸酶的规模化生产及在免疫酶技术领域中的应用提供了重要的参考依据.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王君伟	东北农业大学动物医学学院	214	1491	20.0	26.0
2	高明春	东北农业大学动物医学学院	49	148	7.0	8.0
3	张润祥	东北农业大学动物医学学院	10	31	4.0	4.0
4	李雪萌	东北农业大学动物医学学院	1	5	1.0	1.0